文章题目：β-Glucan–conjugated anti–PD-L1 antibody enhances antitumor efficacy in preclinical mouse models

发表期刊：Carbohydrate Polymers（2024.01）

影响因子：11.2

通讯单位：中国海洋大学医药学院

        免疫检查点阻断（Immune checkpoint blockade, ICB）疗法是癌症免疫治疗中最流行和最有效的方法之一。其中，程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1, PD-L1）和程序性死亡受体1（Programmed death receptor, PD-1）免疫阻断疗法是最具代表性的ICB疗法靶点。以PD-L1为靶点的抑制性抗体，例如：atezolizumab、avelumab和durvalumab，已被美国食品和药物管理局（FDA）批准用于治疗包括黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈部癌症、肝细胞癌和胃癌等多种癌症类型。然而， PD-L1抗体并非能对所有患者产生良好治疗效果，有些患者还会出现免疫相关副作用。

        受到APC（Antibody-drug conjugate）的启发，将含有免疫激活作用的免疫激动剂与抗体共轭构建免疫刺激抗体共轭物（Immune-stimulating antibody conjugates, ISACs）可能是改善抗PD-L1抗体治疗的一种有效途径。在这篇文章中，作者将能够结合模式识别受体和调节免疫系统的的β葡聚糖DAG与PD-L1抗体构建新型ISAC (AGC)，AGC可通过激活先天免疫反应和细胞桥接效应来增强抗肿瘤免疫反应。

        首先是AGC的制备，从Durvillaea antarctica中提取β葡聚糖DAG通过还原胺化和酰胺化两步反应在还原端安装四嗪接头，随后与连接有环辛烯的PD-L1抗体10F.9G2通过IEDDA点击化学连接，获得葡聚糖基化修饰的PD-L1抗体AGC（Figure 1a）。获得AGC之后，作者首先检测了其与PD-L1和dectin-1的结合能力，发现AGC能够在分子和细胞水平与PD-L1（Figure1 B and D）和dectin-1（Figure1 C and E）结合，这说明DAG和10F.9G2的偶联不会影响其生物活性。

Figure 1. AGC characterization and antigen binding analysis.

        作者在最初的课题设计中假设AGC可以结合肿瘤细胞上的PD-L1和树突状细胞上的dectin-1，从而有效地在它们之间建立起一座桥梁。为了验证这一点，作者将预先染色的小鼠肿瘤细胞和小鼠BMDCs在AGC存在下共同培养，进行了细胞桥试验。使用流式细胞仪进行分析双阳性细胞的比例，可以发现相比于10F.9G2处理的细胞，AGC处理后BMDCs与肿瘤细胞的结合明显增加（Figure 2A and B）。这表明，AGC确实能像我们最初假设的那样促进癌细胞和免疫细胞的结合，实现细胞桥接。

Figure 2. AGC enhance the bridging effect of BMDCs on B16F10 (A) and MC38 cells (B).

        在确定AGC能够有效桥接肿瘤细胞和免疫细胞后，作者通过接种了MC38肿瘤的C57BL/6小鼠评估抗肿瘤疗效。可以发现，AGC表现出最优越的抗肿瘤效果（Figure3 A-E）。对其抗肿瘤机制进行分析发现，DAG提高了肿瘤微环境中DCs细胞的浸润（Figure 3F），而10F.9G2则促进了CD8⁺T细胞的浸润（Figure 3G），AGC则同时提高了DCs（通过细胞桥接募集DCs）和CD8⁺T细胞的浸润（Figure 3 F and G），增强了瘤内炎症因子的表达（Figure 3H），这可能表明先天免疫和适应性免疫的共同参与肿瘤杀伤。

Figure 3. AGC reduce tumor burden in MC38 homograft mouse model.

        作者进一步对早期治疗肿瘤样本进行RNA序列分析、流式细胞术免疫分型、细胞因子水平检测和IHC分析发现，DAG促进了多种免疫细胞的瘤内浸润（Figure 4B and C），实现了APC细胞的成熟和抗原呈递（Figure 5D and E）、CD8⁺T细胞的活化（Figure 4 F-H）、先天性免疫反应和dectin-1信号通路的激活（Figure 4K）。这些结果表明AGC更广泛地诱导免疫反应，改善肿瘤微环境，协同先天性免疫和适应性免疫发挥强大的抗肿瘤效力。

Figure 4. AGC reshapes a distinct immunophenotypic signature during early treatment in tumor-bearing mice.

原文链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0144861723010299#bb0180

作者：汪浩

审核：李全才、吕友晶

编辑：邵萌

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